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Vol. 201. Núm. 9.
Páginas 548-556 (septiembre 2001)
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Páginas 548-556 (septiembre 2001)
Ingeniería celular y diabetes mellitus
Cell engineering and diabetes mellitus
G. Bernáa, T. León-Quintoa, E. Fuentesa, E. Andreua, A. Nadala, E. Rochea, F. Martína, J A. Reiga, B. Soriaa
a Instituto de Bioingeniería. Universidad Miguel Hernández de Elche. Alicante.
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Fig. 1. Bioingeniería de líneas celulares neuroendocrinas. La línea celular AtT-20 procedente de la pituitaria anterior es transfectada de forma progresiva (iterative engineering) con el gen de la insulina humana (hIns), el del transportador de glucosa (Glut-2) y el de la glucoquinasa (GK). La nueva línea celular responde a glucosa a concentraciones fisiológicas, aunque no está presente el primer pico de la secreción bifásica de insulina.
Fig. 2. Obtención de líneas celulares beta transformadas. A: El oncogén SV40 acoplado al promotor de la insulina de rata (RIP) genera la línea tumoral ßTC. B: Sistema tet-off: fusión del gen que codifica el represor de tetraciclina (tetR) con el dominio C-terminal de la proteína 16 del virus herpes simples (VP16). Esta fusión permite la conversión del tetR de procariota en un transactivador de eucariotas. El sistema tetR/VP16 está bajo el control de RIP. La proteína codificada por este sistema (tTA) estimula a un promotor mínimo fusionado con la secuencia del operador de tetraciclina (tet-op) permitiendo la expresión del antígeno Tag SV40 (SV40Tag) y, por tanto, la proliferación de células-ß. La presencia de tetraciclina (tet) inhibe la unión de tTA con la secuencia promotora tet-op, no activándose la expresión de SV40 Tag e inhibiendo la proliferación de células-ß. I: intrón. Poly A: cola de adeninas.
Fig. 3. Factores de crecimiento implicados en la regeneración y neogénesis de islotes a partir de células ductales. IGF-1: factor de crecimiento parecido a la insulina-1. TGF-a: factor de crecimiento tumoral-a. TGF-ß: factor de crecimiento tumoral-ß; VEGF: factor de crecimiento del endotelio vascular. Reg: proteína regeneradora; INGAP: proteína asociada a la neogénesis de islotes; EGF: factor de crecimiento epidermal. PTH-related protein: proteína relacionada con la parathormona.
Fig. 4. Estructura de la construcción pHIP-ß-geo/PGK-Hygro (GB2). HIP: promotor del gen de la insulina humana; ß-geo: gen de resistencia a neomicina; PGK-Hygro: gen de resistencia a higromicina bajo el promotor de la fosfoglicerato quinasa.
Fig. 5. Diagrama de flujo del proceso de diferenciación desde células madre embrionarias pluripotenciales (mESC) a células que contienen insulina susceptibles de ser transfectadas. NIC: nicotinamida (modificado de Soria et al57). ß-geo: gen de resistencia a neomicina; PGK-Hygro: gen de resistencia a higromicina bajo el promotor de la fosfoglicerato quinasa.
Fig. 8. Cambios en los niveles de glucosa en sangre después de trasplantar los clones de célula secretora de insulina. Niveles de glucosa en sangre de ratones diabéticos controles operados (o) (n= 6), ratones trasplantados (·) (n = 4). La línea discontinua indica el día del trasplante (indicado como semana 0).
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